组织培养的条件和培养基制备注意事项

  培养基的成分

  1、用于植物组织培养的培养基迄今不下几十种。归纳起来，任何一种培养基均有以下几部分组成：无机盐(大量元素、微量元素)，有机化合物(蔗糖、维生素类、氨基酸、核酸及其他水解化合物)，铁盐螯合剂，植物激素。

  植物激素的纯度对于组织培养的成功至关重要。接种的外植体，其分化速度(长芽)和分化方向(长根)，均取决于所加激素的种类、数量及比例。简言之，主要是生长素和细胞分裂素的加入量以及两者的比例。一般生长素类包括吲哚乙酸、吲哚丁酸、萘乙酸;细胞分裂素类包括激动素、苄基氨基嘌呤、二甲基丙烯氨基嘌呤。

  培养基中的糖类主要是蔗糖，少数情况下使用葡萄糖。大量生产可使用蔗糖。糖在培养基中的作用是提供碳源，同时用于维持渗透平衡，琼脂是固体培养基中的成分，作为固化剂支持。培养物在培养基的成本消耗中，琼脂占有相当大的比例，培养基中琼脂的加入量一般为4-7g。

  2、在组织培养生产中，培养基的制备对母液的需求量相当大，需一批一批地连续配制。为简化配制过程，提高工作效率，一般将各种所需药品先配制成高浓度溶液，贮备起来。到配制培养基时，按要求的浓度取一定量稀释即可;我们称这些高浓度的溶液为贮备液，习惯上称母液。

  制备母液时，先将所有药品分成几组，每组药品制成一种母液。分组的原则是同组药品混合溶解时不会发生质的变化，也不产生沉淀。一般将药品分成5组：大量元素、微量元素、铁盐、有机化合物类和植物激素。其中植物激素母液有若干种，每种激素都先制成1mg/ml的溶液。

  母液制备注意事项

  1、药品称量要尽可能准确。大量元素用百分之一(千分之一)天平称取，而微量元素、有机物类、植物激素等，则必须使用万分之一的天平。

  2、母液配制完毕注入试剂瓶后，一定要标明母液的名称、序号、浓度和配制日期等。

  3、配制好的母液应放置在冷藏箱内保存，尤其是有机物和激素类。

  培养基的配制

  1、将用于配制培养基的容器洗净，加入培养基总量四分之三的蒸馏水，放入所需的琼脂和糖，然后加热溶解。在加热过程中应不断地搅拌，以避免琼脂粘锅或溢出。

  2、待琼脂和糖完全溶解后，按顺序加入各贮备液以及所需的植物激素。

  3、用蒸馏水定容补充由于加热蒸发所损失的体积。

  4、用蒸馏水调整pH。

  5、通过漏斗或下口杯将培养基注入组组织培养容器内，注入量为瓶容积的十分之一左右。灌装要迅速，尽可能避免培养基粘在瓶壁上，且应在培养基未冷却之前灌装完毕。

  6、用封口膜或含透气膜的塑料盖将瓶口或试管口封严。

  7、将封装好的组织培养容器码放在高压灭菌锅内。于105Pa压力、121℃下灭菌20分钟。如使用小型手提式灭菌锅时，一定要注意，当锅内压力上升时，先反复放气数次，将锅内空气排尽以后，再计算时间，否则达不到高压灭菌的效果。

  8、对于一些受热易于分解的物质，如维生素类，可采取先过滤灭菌的方法。待培养基灭菌后，尚未冷却之前(40℃左右)加入并摇匀。经过高压灭菌的培养基可在室温下存放3-5天，或在冷藏箱内存放10天左右，最好在短时间内用完。