外植体采集与消毒
4月中旬,选择生长健壮、无病虫害植物的半木质去叶新梢作为外植体。将新梢剪成1 cm-2 cm的带腋芽茎段,按下列程序消毒:自来水下冲洗20 min,之后转移至超净工作台上,先用75%的乙醇消毒30 s,再用1%的次氯酸钠消毒10 min,无菌水冲洗1遍后,用0.5%的次氯酸 钠消毒10 min〜13 min,最后用无菌水冲洗3〜4遍。
培养条件
温度25°C±2°C,光照强度25卩mol «m-2 «s-1,光照时间12 h/d。
启动培养
将消毒后的外植体接种至启动培养基:WPM+6-BA 0.5 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂6 g/L,7 d〜10 d外 植体开始萌发,30 d后芽长至2 cm〜3 cm时进行增殖培养。
增殖培养
将启动培养诱导形成的高度为2 cm〜3 cm幼芽切下,转接至增殖培养基:WPM+6-BA 1.5 mg/L〜2. 5 mg/L+NAA 0.05 mg/L〜0.1 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂6. 5 g/L,增殖周期为30 d。
生根培养
将高度为4 cm〜6 cm的无根幼苗进行两步生根培养:第一步转入1 /2MS+IBA 5 mg/L+NAA 0.5 mg/L+ 蔗糖20 g/L+琼脂6.5 g/L培养基,黑暗培养11 d进行根诱导;第二步转入MS+蔗糖30 g/L+琼脂6.5 g/L 培养基,在光照下继续培养。
炼苗移栽
炼苗
生根培养30 d后,当幼苗基部长岀3〜5条长1 cm的新根即可进行炼苗。将生根瓶苗在温室内放置5 d, 然后半开瓶口 1 d〜2 d,是瓶苗逐步适应外界的环境。温室温度在20 °C-30 °C,湿度在60%〜90%。
基质准备
基质配制
移栽基质选用草炭和珍珠岩的混合基质,二者的体积比为3: 1.
基质消毒
移栽前用50%多菌灵可湿性粉剂500倍液喷匀基质,充分搅拌善用薄.膜密封,堆置7 d后揭开薄膜, 晾24 h即可使用。
移栽
炼苗结束后,取岀培养瓶中的生根组培苗,用清水洗净根系粘附的培养基,栽入6. 5 cmX6. 5 cm 的营养钵中,摆放在温室苗床上,并立即浇透水。
移栽后管理
温、湿度管理
移栽后立即搭小拱棚密闭保湿,保持小苗的生长温度25 °C±3 °C,相对湿度90%以上。移栽10 d〜 15 d后,逐渐揭膜,透气通风,直至完全适应外界的环境。
光照管理
组培苗移栽后,用遮光率为50%〜75%的遮阳网遮阴。小苗长岀新叶后,及时撤去遮阳网。
施肥
当新叶岀现时进行首次施肥,以后每隔2〜3周追肥一次,施用N-P2O5-K2O比例为20-20-20的水溶性 平衡肥,稀释1000〜2000倍叶面喷施。
版权声明:文章来源于http://www.zupei17.com/news/detail/id/468.html,转载请注明出处!