多花黄精根茎芽高效组培的试验材料与方法

材料与方法

  1、试验材料

  2012年6月至2013年5月，在中国林业科学研究院亚热带林业实验中心年珠林场林下经济植物栽培实验基地挖取多花黄精，切取根茎芽，参考周新华等人对外植体的灭菌处理方法，将消毒后的根茎芽接种在MS培养基上进行初代培养。培养约45d后，选择初代培养的生长健壮的无菌苗作为试验材料。

  2、试验方法

  2.1、外植体的采集时间对无菌苗增殖的影响试验

  选取分别于11～12、1～2、3～4、5～6、7～8和9～10月等6个时段采集的外植体初代培养后生长健壮的的无菌苗作为试验材料，就外植体采集的不同时间对其腋芽增殖培养的影响情况进行了试验，每个处理重复3次。将不同时间采集的外植体初代培养后生长健壮的无菌苗接种在不定芽诱导培养基MS+NAA1.5mg·L-1+KT1.5mg·L-1中，培养45d后观察并统计其萌芽情况和萌发芽数，并按如下公式计算平均萌发芽数：

  平均萌发芽数=萌发的总芽数/接种的瓶数。

  2.2、增殖时间及切分方式对无菌苗增殖的影响试验

  以初代培养后生长健壮的无菌苗为试验材料，将根茎芽分别切成1、2、3份的无菌块茎，分别以切分处理Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ来表示，并将其分别接种在MS+NAA1.5mg·L-1+KT1.5mg·L-1的培养基中，共计3个处理，每个处理接种20瓶，重复3次，分别于接种后的第25、35、45、55、65天观察无菌苗的增殖情况，统计其萌发芽数，亦按如下公式计算平均萌发芽数：

  平均萌发芽数=萌发的总芽数/接种的瓶数。

  2.3、继代培养次数对无菌苗增殖和生根的影响试验

  从初代培养后生长健壮的无菌苗上切取1个腋芽作为第1次继代培养的试验材料，其后每次继代培养的试验材料均为其上一次继代培养的增殖腋芽，每次继代培养均将供试腋芽接种在MS+NAA1.5mg·L-1+KT1.5mg·L-1培养基上进行培养，共进行了7次继代培养，每隔45d完成1次继代培养，每个处理接种20瓶，重复3次，每次继代培养结束末期观察并统计其萌芽情况和萌发芽数，均按如下公式计算平均萌发芽数：

  平均萌发芽数=萌发的总芽数/接种的瓶数。

  以每一次继代培养后的无菌苗作为试验材料进行生根试验，每个处理重复3次。将每一次继代培养结束后的无菌苗均接种在1/2MS+NAA1.0mg·L-1的生根培养基中，培养45d后观察其生根情况，并统计每个处理相应的生根数和生根率。

  生根率=生根瓶数/接种总瓶数;

  平均生根数=生根总条数/生根瓶数。

  2.4、添加剂对其无菌苗增殖和生根的影响试验

  在增殖和生根培养基中分别添加浓度为0.05、0.10、0.20、0.40和0.50g·L-1的活性炭，共计5个处理，每个处理接种20瓶，重复3次，培养45d后观察其组培苗增殖和生根情况，并统并计算平均萌发芽数、生根数和生根率。

  平均萌发芽数=萌发的总芽数/接种的瓶数;

  生根率=生根瓶数/接种总瓶数;

  平均生根数=生根总条数/生根瓶数。

3、培养条件

  在以上各试验的培养基中均添加琼脂6.1g·L-1，蔗糖30g·L-1，将培养基的pH值均调节为5.8，并将培养基置于121℃下高压灭菌17min;以上试验均在培养温度为(24±2)℃、光照强度控制在1500～2000lx的范围内、每天光照时间12h、湿度控制在70%左右的环境中进行。

  4、数据处理

  采用SPSS18.0统计分析软件进行方差分析和多重比较。多重比较采用显著系数为0.05的Duncan多范围检验方法，所有检验数据都在同一量纲上进行分析。