叶下珠组培方法研究

本研究通过组织培养，对叶下珠进行芽的诱导、增殖、生根和炼苗移栽等，建立了一套完整的叶下珠组培快繁体系，为叶下珠大规模繁殖提供技术参考。

叶下珠组培方法

1、培养条件

基本培养基为 MS，琼脂 7.5 g·L-1，蔗糖为 30 g·L-1，pH 5.8～6.0。培养温度(25 ± 1) ℃，光照时间12 h·d -1，光照强度1000～1500 lx。

2、外植体接种

选取长势均匀的叶下珠植株，用剪刀剪取位于植株中部的茎段，去除叶片与假叶柄。加1～2滴洗洁精将茎段表面洗刷干净，流水冲洗5～6 h。于超净工作台上用75%酒精浸泡30 s，然后用0.1%升汞消毒13 min，无菌水冲洗5～6次，并用无菌滤纸擦干，置于接种盘上。用手术刀将外植体切成1.5～2 cm带节茎段，生物学顶端朝上接种于培养基上。

3、生长调节剂配比试验

将消毒外植体接种到按单因素多水平设计的不同生长调节剂配比的、添加0.5 g·L-1活性炭的MS培养基中，共计7组，分别为：IBA为0.2 mg·L-1，6-BA分别为1.0、1.5、2.0、3.0 mg·L-1;6-BA 为 1.5 mg·L-1，IBA 分别为 0.1、0.2、0.5、1.0 mg·L-1 。每组 15 瓶，每瓶接 1个外植体，每3 d观察1次，15 d统计诱导情况。

4、诱导培养基 得出芽诱导佳生长调节剂配方后，对比添加0.5 g·L-1活性炭的MS和1/2MS培养基的诱导效果，共2组，每组24瓶，每瓶接1个外植体，每4 d观察1次，20 d后统计诱导情况。

5、不同浓度6-BA对叶下珠芽的处理

将茎段诱导出的芽在超净工作台上切成1.5～2 cm带芽茎段，接种至添加不同浓度6-BA的培养基中，共计3组，每处理5瓶，每瓶2个，即每处理10个外植体，每5 d观察1次，25 d后统计芽增殖情况。

6、不同浓度NAA与IBA对丛生芽的处理

将增殖扩繁的丛生芽在超净工作台上分成单个芽，接种至添加蔗糖20 g·L-1的不同培养基中，共计6组，每处理5瓶，每瓶10个芽，即每处理50个芽，每5 d观察1次，25 d后统计生根、长势情况。

7、炼苗

将生根的瓶苗转移至培养室外进行炼苗，处理时间设置见表5。炼苗后清水洗净根部培养基，移栽至加水拌成泥状的菜园土基质。栽培条件：自然光，气温25～30 ℃。移栽15 d后统计成活率。

叶下珠的主要药理活性成分柯里拉京是一种多酚类物质，极容易氧化。在外植体诱导丛生芽的过程中，茎节的切口会分泌大量次生代谢产物，导致外植体褐化，降低组培成功率。外植体褐化程度高，需通过多次转接以避免褐化，但是多次转接易造成污染。本试验通过添加活性炭以吸收次生代谢物，抑制褐化效果良好，也减少人为操作带来的污染。

在芽增殖试验中，1.0 mg·L-1 6-BA 和0.2 mg·L-1 IBA的生长调节剂组合是较适合芽增殖的生长调节剂配比，但他们认为芽增殖中6-BA佳浓度为2.0 mg·L-1。本研究中6-BA浓度为1.0、1.5、2.0 mg·L-1的芽增殖系数均达3倍以上，并以1.0 mg·L-1时增殖倍数大，小芽长势好。

在炼苗移栽研究中，基质为泥状菜园土。泥状土在栽培初期水分饱满，但后期易结块，对组培苗成活率造成一定影响。可适当添加一定比例的有机土进行改良，调整土壤疏松度，以利于移栽苗成活。