1 材料与方法
1.1 材料
艾叶和苍术购于杭州华东中药饮片有限公司;乙醇、甲醛、高锰酸钾、过氧乙酸为分析纯试剂;采用金线莲组培的继代培养基进行菌类培养。
1.2 方法
1.2.1 处理设计
设置3个艾叶用量梯度1.0，2.0，4.0 g.m-3和3个苍术用量梯度1.0，1.5，2.0 g.m-3，分别测定组培室空气的含菌数，获取艾叶和苍术的优化用量。比较艾叶和苍术联合熏蒸法与甲醛高锰酸钾熏蒸法、过氧乙酸熏蒸法的灭菌效果。
1.2.2 熏蒸灭菌方法
艾叶熏蒸方法。艾叶经干燥后直接点燃熏蒸。
苍术熏蒸方法。用95%乙醇浸泡24 h，用时以乙醇为助然剂点燃熏蒸。
甲醛高锰酸钾熏蒸方法。甲醛2.0 m L.m-3+高锰酸钾1.0 g.m-3熏蒸。注意将甲醛溶液倒入盛装高锰酸钾的容器后，人员立即撤离。
过氧乙酸熏蒸方法。20%过氧乙酸3.0 m L. m-3液置于耐热容器中，电炉加热熏蒸。
1.2.3 菌类检测与统计
采用自然沉降法测定菌类数量。打开培养皿盖暴露15 min，分别在熏蒸前、后 (熏蒸后3 d)各采样1次，在室温下培养2 d，然后按霉菌、细菌进行菌落数分类统计。分别在组培室的四周(距墙50 cm左右)和中间两处共6个点进行采样。根据奥氏公式计算组培室空气的含菌数(m-3)，再计算得出灭菌率，分析各方法的灭菌效果。
空气菌落总数/m-3=50 000 N/A×T。
式中：A为培养皿面积 (cm2)，T为培养皿暴露时间 (min)，N为培养皿平均菌落数。
2 结果与分析
2.1 艾叶熏蒸的灭菌效果
在不同艾叶用量梯度下，金线莲组培室空气灭菌效果存在差异 (表1)。
表1 艾叶不同用量熏蒸处理的灭菌效果
由表1可知，艾叶用量为4.0 g.m-3时，灭菌率高，为60.8%～68.4%;用量为1.0 g.m-3时，灭菌率低，为43.2%～63.9%。结果显示，艾叶对霉菌的灭杀效果优于细菌。随着艾叶用量的增加，两者间的差异降低。艾叶用量为1.0 g.m-3时，对霉菌的灭杀率与对细菌的灭杀率间的差异大，为20.7百分点。因此艾叶用量2.0 g.m-3进行熏蒸是工厂化生产较优且经济的选择。
2.2 苍术熏蒸的灭菌效果
在不同苍术用量梯度下，金线莲组培室空气灭菌效果存在差异 (表2)。
表2 苍术不同用量熏蒸处理的灭菌效果
由表2可知，苍术用量在1.0，1.5和2.0 g. m-3时，金线莲组培室空气灭菌效果存在差异。苍术对细菌的灭杀效果优于霉菌。随着苍术用量的增加，两者间差异降低。苍术用量为1.0 g.m-3时，对细菌的灭杀率与对霉菌的灭杀率间的差异大。用量为1.5 g.m-3时，灭菌率高。因此采用苍术用量1.5 g.m-3进行熏蒸是较优的选择。
2.3 不同熏蒸方法灭菌效果比较
由表3可知，1.0 g.m-3高锰酸钾和2.0 mL. m-3甲醛熏蒸法总灭菌率为71.5%，灭菌后含菌量<90 m-3，2.0 g.m-3艾叶+1.5 g.m-3苍术联合熏蒸的总灭菌率为65.4%，灭菌后含菌量<90 m-3，灭菌效果均达到组培对空气质量的要求;3.0 m L. m-3过氧乙酸熏蒸总灭菌率为67.0%，灭菌后含菌量为103 m-3。前者灭菌效果好，后两者灭菌效果差异不大，但甲醛高锰酸钾与过氧乙酸对人体伤害极大，要慎用;而苍术与艾叶联合熏蒸法，对人体几乎无害，且2种药材来源广泛，价格便宜，是一种理想的空气灭菌替代品。
表3 不同熏蒸处理的灭菌效果
2.4 艾叶和苍术联合熏蒸法在金线莲组培苗工厂化生产中的应用效果
在金线莲组培苗工厂化生产中，连续3年应用艾叶与苍术联合熏蒸法对组培室进行灭菌，取得较明显的效果。
由表4可知，与2010年相比，2012年金线莲组培苗细菌污染下降率为1.5百分点，霉菌污染下降率为1.6百分点。艾叶与苍术联合熏蒸法对金线莲组培生产空气灭菌效果较佳，适用于金线莲组培苗工厂化生产。
表4 艾叶与苍术联合熏蒸后的金线莲组培污染率
3 小结与讨论
艾叶、苍术是常用中药材，其资源丰富，价格低廉，用于熏蒸灭菌时，操作简单易行且持续时间长久，已在医院的手术室、母婴产房、输液室以及发热门诊等灭菌中得以应用，但在组培室空气灭菌中应用较少报道。艾叶、苍术熏蒸能有效地灭杀或抑制细菌和真菌，本试验结果表明艾叶用量为2.0 g.m-3时的灭菌率为59.4%～69.0%，苍术用量为1.5 g.m-3时的灭菌率为51.4%～59.3%;艾叶对霉菌的灭杀效果比对细菌的好，而苍术对细菌的灭杀效果则优于对霉菌的效果。艾叶用量2.0 g.m-3和苍术用量1.5 g.m-3联合熏蒸法灭菌率达到65.4%;甲醛高锰酸钾熏蒸法灭菌率为71.5%;过氧乙酸熏蒸法灭菌率为67.0%。连续3年采用艾叶和苍术联合熏蒸，金线莲组培苗的污染率均降低。
目前金线莲组培室空气灭菌，常采用甲醛高锰酸钾、过氧乙酸熏蒸。甲醛能引起慢性中毒，出现黏膜充血、皮肤刺激、过敏性皮炎等症，高锰酸钾与过氧乙酸都具有较强的腐蚀性，对皮肤和呼吸道有很大的刺激性，损伤呼吸道黏膜。苍术与艾叶联合熏蒸具有较强的杀菌作用，且效果持续时间长，对人体几乎无伤害，克服了传统灭菌方法的缺点，具有安全、高效、无毒害副作用的特点，是金线莲组培生产中一种理想的空气灭菌替代品。
