构树别名楮桃,为落叶乔木,高10 - 20m;树皮暗灰色;小枝密生柔毛。树冠张开,卵形至广卵形;树皮平滑,浅灰色或灰褐色,不易裂,全株含乳汁。为强阳性树种,适应性特强,抗逆性强。
构树具有速生、适应性强、分布广、易繁殖、热量高、轮伐期短的特点。其根系浅,侧根分布很广,生长快,萌芽力和分蘖力强,耐修剪。抗污染性强。在中国的温带、热带均有分布,不论平原、丘陵或山地都能生长,其叶是很好的猪饲料,其韧皮纤维是造纸的高级原料,材质洁白,其根和种子均可入药,树液可治皮肤病,经济价值很高。
形态特征
叶螺旋状排列,广卵形至长椭圆状卵形,长6-18cm,宽5-9cm,先端渐尖,基部心形,两侧常不相等,边缘具粗锯齿,不分裂或3-5裂,小树之叶常有明显分裂,表面粗糙,疏生糙毛,背面密被绒毛,基生叶脉三出,侧脉6-7对;叶柄长2.5-8cm,密被糙毛;托叶大,卵形,狭渐尖,长1.5-2cm,宽0.8-1cm。
花雌雄异株;雄花序为柔荑花序,粗壮,长3-8cm,苞片披针形,被毛,花被4裂,裂片三角状卵形,被毛,雄蕊4,花药近球形,退化雌蕊小;雌花序球形头状,苞片棍棒状,顶端被毛,花被管状,顶端与花柱紧贴,子房卵圆形,柱头线形,被毛。
聚花果直径1.5-3cm,成熟时橙红色,肉质;瘦果具有等长的柄,表面有小瘤,龙骨双层,外果皮壳质。花期4-5月,果期6-7月。
生长习性
喜光,适应性强,耐干旱瘠薄,也能生于水边,多生于石灰岩山地,也能在酸性土及中性土上生长;耐烟尘,抗大气污染力强。
产地分布
构树分布于中国黄河、长江和珠江流域地区,也见于越南、日本。适应性强,耐旱、耐瘠。常野生或栽于村庄附近的荒地、田园及沟旁。
构树的组培体系建立
外植体的选择
供试材料为生长健壮、无病害的构树叶片。
组培对比方法
以MS培养基为基本培养基,改变激素种类、浓度及添加琼脂、蔗糖形成不同培养基组合,并于光照时间为12小时,光照强度为2500 lux,培养温度为(25±2)℃的条件下对试验材料进行培养。
外植体消毒的对比
将洗干净的构树叶片用75%乙醇溶液浸泡30秒,经无菌水冲洗2~3次,置于灭菌液中灭菌,并设置空白对照。
灭菌液分别为9% Ca(ClO)2,0.5%升汞和10%双氧水,灭菌时间分别设定为5,10,15分钟。灭菌完成后记录叶片的死亡率,并用无菌水冲洗4~10次,沥干水后迅速将叶片接种到培养基中,每瓶接种3~4个,10瓶为一组,共接种9组,光照培养室中培养7天后统计叶片的污染率和成活率。
愈伤组织及芽苗的诱导的对比
以MS+0.8%琼脂+3%蔗糖为基础培养基,加入不同质量浓度的6-BA和NAA,6-BA采用0.5,1.0,1,5mg/L等3个水平。NAA采用0.5,1.0,1,5mg/L等3个水平.将叶片切成1平方厘米左右的正方形,接入培养基中进行培养。每个水平接种20瓶,每3块叶片,培养20天后观察并记录愈伤组织及芽苗的生长情况。
壮苗培养基的筛选对比
以MS+0.8%琼脂+3%蔗糖为基础培养基,加入不同质量浓度的6-BA和NAA。6-BA和设置1.0,1,5,2.0 mg/L等3个水平,NAA设置0.10,0.15,0.20 mg/L等3个水平。选择长势较好的基础苗进行壮苗,每个水平做15瓶,每瓶1~2株。接种后置于光照培养室中,20 天后观察并记录壮苗结果。
构树生根培养基的筛选对比
以1/2 MS+0.8%琼脂+3%蔗糖为基础培养基,加入不同质量浓度的6-BA和NAA。采用6-BA采用0.5,1.0,1,5mg/L等3个水平。NAA采用0.2,0.3,0.4,0,5 mg/L等4个水平。每瓶接种1~2个幼苗,每个水平接种15瓶,培养15 天后观察并记录构树健壮幼苗的生根情况。
构树的驯化移栽
将长有构树幼苗的培养瓶转移至半遮阴的自然光下,2~3天后开口炼苗。将营养钵中装入蛭石和珍珠岩,洗干净幼苗根部黏附的培养基后,将幼苗移入营养钵中并浇足水。用塑料薄膜为幼苗搭建小拱棚并喷雾保湿,同时注意通风,随后逐渐降低湿度,15 天后揭去棚膜,让幼苗在自然条件下生长。
结果与分析
消毒剂及消毒方法的比较
灭菌效果很好的处理是75%乙醇溶液浸泡30 秒后,再用0.5%HgCl2灭菌15 分钟 ,除菌率可以达到68.2%,外植体的成活率可达43.6%。
愈伤组织及芽苗的培养基对比
构树叶片在愈伤组织诱导培养基中培养20天后,观察不同浓度激素比例下叶片的增殖倍数与芽苗高度等生长状况。由实验结果可知,对愈伤组织的影响较大的激素为6-BA,当20天质量浓度逐渐增大时,芽的增殖倍数逐渐变大;当6-BA质量浓度为1.5 mg/L,NAA质量浓度为1.0mg/L时,增殖倍数为5.4,愈伤组织分化效果最明显。
因此,诱导愈伤组织分化的很佳培养基配方为MS+1.5 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA+0.8%琼琼脂+3%蔗糖。
构树壮苗培养基的筛选
从试验得知对壮苗影响较大的激素为6-BA,当6-BA质量浓度为1.5mg/L,NAA质量浓度为0.2 mg/L时,壮苗效果最明显,此时株高为3.6 cm。
由此可得壮苗效果很佳的培养基配方为MS+1.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+0.8%琼脂+3%蔗糖。
生根培养基的筛选
接种至生根培养基12 天后可以看到根原基分化出的愈伤组织,15天后可看到诱导出的细小不定根。从试验看出,当6-BA质量浓度为0.5mg/L,NAA质量浓度为1.0 mg/L时,根的生长情况很好,此时根原基的发生率为93%。
由此得出很佳的生根培养基为1/2 MS+0.5 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA+0.8%琼脂+3%蔗糖。
构树幼苗的驯化移栽
从试验对比得知,构树幼苗在移栽到蛭石中的成活率高于珍珠岩。在珍珠岩中,叶片失水严重,苗木萎蔫,生长不良;而蛭石中的幼苗则生长良好,移栽25 天后,长高3~5cm,叶片明显变大且长出1~2条新根,原来的根伸,1~2 cm。
试验结论
无菌材料是植物组培快繁的前提,对叶片进行消毒时,时间过长可能会对材料造成毒害,影响叶片的生命活力;时间过短可能会造成消毒不彻底。
由试验得出:很佳灭菌方法为0.5% HgCl2的处理15分钟,在考虑选择何种灭菌剂的同时,还综合考虑了灭菌时间对灭菌效果的影响。但也有研究认为,构树叶片外植体很佳消毒方法是0.1% 的HgCl2(加吐温80和0.5%次氯酸钠的二次灭菌法,这可能是由于试验材料的来源不同及其生长环境的差异,导致材料所带的微生物不同,从而需要灭菌的强度也有所差异。
在组织培养中,生长素类物质的主要作用是促进新梢生长,诱导外植体产生愈伤组织及促进培养组织的延伸生长;细胞分裂素类物质的主要作用是促进细胞的分裂和分化,诱导胚状体和不定芽的形成。在离体条件下,器官的诱导并不是由某种生长激素的浓度所决定,而是由那些参与分化的物质间的比例关系所决定,当6-BA与NAA的比例低时有利于愈伤组织的形成和芽的生长;比例高时有利于芽的分化。
试验研究结果表明,诱导愈伤组织分化时6-BA与NAA的适宜比例为3:2;壮苗时6-BA与NAA的适宜比例15:2;生根时6-BA与NAA的适宜比例为1:2。