摘要：杂交构树、组织培养、灭菌方法、激素配比、愈伤组织的诱导、芽的增殖、壮苗及生根...
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摘要：
杂交构树、组织培养、灭菌方法、激素配比、愈伤组织的诱导、芽的增殖、壮苗及生根
杂交构树的情况
杂交构树为桑科构属落叶乔木，又名鹿仔树、榖浆树，是构树优良种源的杂交种。具有速生、适应性强、分布广、易繁殖、热量高、轮伐期短的特点。其根系浅，侧根分布很广，生长快，萌芽力和分蘖力强，耐修剪，抗污染性强，是良好的经济林和生态林品种。构树在中国的温带、热带均有分布，不论平原、丘陵或山地都能生长，其叶是很好的猪饲料，其韧皮纤维是造纸的高级原料，材质洁白，其根和种子均可入药，树液可治皮肤病，经济价值很高。
杂交构树的价值
现代研究表明，构树叶总黄酮具有抑菌抗癌防腐的作用;其果实楮实子具有清肝明目、补肺益肾之功效，所含有的红色素及提取物具有不同程度的抗氧化作用;构树纤维表面光滑，部分纤维还有不明显的转曲，具有类似苎麻的横纹，可广泛用于造纸产业及新型纺纱材料等领域;其还具有吸附空气中的有害气体和滞尘等功能，是较为优良的生态保健园林绿化树种。
戚亚伟等研究表明，构树叶对养分过剩而导致的小鼠肥硕有治疗效果，并能促进其油脂减少，改变内脏脂肪变性。
王克荣等研究表明，蔬菜害虫能被构树叶汁液有效地杀死，可以用构树叶开发出天然生物杀虫剂。
瞿晓晶等研究表明，构树种子油对羟基自由基的抑制率高达93.56%。
构树子还具有壮筋健骨，清热明目的功效，可用于治疗腰膝不适，肾亏目昏。此外，构树叶还可以代替苜蓿草粉和豆粕做成饲料添加在牛羊等的日粮中，其树皮、木材、叶、花、果实、种子、根、乳汁等皆可综合利用，经济效益潜力很大。
杂交构树的繁育
目前，构树主要靠常规的无性扦插繁殖，但由于材料来源不足，扦插成活率不高，费时费工，难以满足当前大面积栽培及推广的需要。由于构树具有巨大的经济价值，其需求量也在日趋增加。但杂交构树在自然条件下，生长周期长。目前组培体系已经成熟，国内也有大量的组培企业在生产，产生了很大的经济价值。
构树不同条件下的组培试验
以MS+0.8%琼脂+3%蔗糖为基础培养基，加入不同质量浓度的6—BA和NAA。6—BA采用0.5、1.0、1,5mg/L3个水平。NAA采用0.5，1.0、1,5mg/L3个水平。将叶片切成1 cm3左右的正方形，接入培养基中进行培养。每个水平接种20瓶，每瓶3块叶片，培养20天后观察并记录愈伤组织及芽苗的生长情况。
通过优化灭菌方法和激素配比，进行愈伤组织、芽及根的诱导，建立了构树的组织培养体系。
1、材料
供试材料为生长健壮、无病害的构树叶片。
2、方法
2、1试验条件
以MS培养基为基本培养基，改变激素种类、浓度及添加琼脂、蔗糖形成不同培养基组合，并于光照时间为12h，光照强度为2500lux，培养温度为(25±2)℃的条件下对试验材料进行培养。
2、2试验材料的获取及消毒
将洗干净的构树叶片用75%乙醇溶液浸泡30s，经无菌水冲洗2~3次，置于灭菌液中灭菌，并设置空白对照。灭菌液分别为9% Ca(ClO)2,0.5%升汞和10%双氧水，灭菌时间分别设定为5、10、15 min。灭菌完成后记录叶片的死亡率，并用无菌水冲洗4~10次，沥干水后迅速将叶片接种到培养基中，每瓶接种3-4个，10瓶为一组，共接9组，光照培养室中培养7天后统计叶片的污染率和成活率。
2、3愈伤组织及芽苗的诱导
以MS+0.8%琼脂+3%蔗糖为基础培养基，加入不同质量浓度的6-BA和NAA。6-BA采用0.5、1.0、1,5mg/L3个水平。NAA采用0.5、1.0、1,5 mg/L3个水平。将叶片切成1 cm2左右的正方形，接入培养基中进行培养。每个水平接种20瓶，每瓶3块叶片，培养20天后观察并记录愈伤组织及芽苗的生长情况。
2、4壮苗培养基的筛选
以MS+0.8%琼脂+3%蔗糖为基础培养基，加入不同质量浓度的6-BA和NAA。6-BA和设置1.0,1.5,2.0 mg/L等3个水平，NAA设置0.10,0.15,0.20 mg/L等3个水平。选择长势较好的基础苗进行壮苗，每个水平做15瓶，每瓶1-2株。接种后置于光照培养室中，20天后观察并记录壮苗结果。
2、5构树生根培养基的筛选
以1/2MS+0.8%琼脂+3%蔗糖为基础培养基，加入不同质量浓度的6-BA和NAA。采用6-BA采用0.5、1.0、1,5mg/L3个水平。NAA采用0.2、0.3、0.4、0,5mg/L4个水平。每瓶接种1~2个幼苗，每个水平接种15瓶，培养15天后观察并记录构树健壮幼苗的生根情况。
2、6构树的驯化移栽
将长有构树幼苗的培养瓶转移至半遮阴的自然光下，2-3天后开口炼苗。将营养钵中装入蛭石和珍珠岩，洗干净幼苗根部黏附的培养基后，将幼苗移入营养钵中并浇足水。用塑料薄膜为幼苗搭建小拱棚并喷雾保湿，同时注意通风，随后逐渐降低湿度，15天后揭去棚膜，让幼苗在自然条件下生长。
3、结果与分析
3、1消毒剂及消毒方法的比较
从试验结果可以得出灭菌效果很好的处理是75%乙醇溶液浸泡30 s后，再用0.5%HgCl2灭菌15 min，除菌率可以达到68.2%，外植体的成活率可达43.6%。
3、2诱导愈伤组织及芽苗培养基的筛选
构树叶片在愈伤组织诱导培养基中培养20天后，观察不同浓度激素比例下叶片的增殖倍数与芽苗高度等生长状况。试验结果得知对愈伤组织的影响较大的激素为6-BA。当20天质量浓度逐渐增大时，芽的增殖倍数逐渐变大，当6-BA质量浓度为1.5 mg/L，NAA质量浓度为1.0mg/L时，增殖倍数为5.4，愈伤组织分化效果最明显。
因此，诱导愈伤组织分化的很佳培养基配方为MS+1.5 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA+0.8%琼脂+3%蔗糖。
3、3构树壮苗培养基的筛选
由试验结果分析可得对壮苗影响较大的激素为6-BA，当6-BA质量浓度为1.5mg/L，NAA质量浓度为0.2 mg/L时，壮苗效果最明显，此时株高为3.6cm。由此可得壮苗效果很佳的培养基配方为MS+1.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+0.8%琼脂+3%蔗糖。
3、4生根培养基的筛选
接种至生根培养基12天后可以看到根原基分化出的愈伤组织，15天后可看到诱导出的细小不定根。由试验得知：当6-BA质量浓度为0.5mg/L，NAA质量浓度为1.0 mg/L时，根的生长情况很好，此时根原基的发生率为93%。由此可以得出很佳的生根培养基为1/2 MS+0.5 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA+0.8%琼脂+3%蔗糖。
3、5构树幼苗的驯化移栽
由试验对比得知：构树幼苗在移栽到蛭石中的成活率高于珍珠岩。在珍珠岩中，叶片失水严重，苗木萎蔫，生长不良;而蛭石中的幼苗则生长良好，移栽25天后，长高3~5cm，叶片明显变大且长出1~2条新根，原来的根伸,1~2cm。
结论
无菌材料是植物组培快繁的前提，对叶片进行消毒时，时间过长可能会对材料造成毒害，影响叶片的生命活力;时间过短可能会造成消毒不彻底。很佳灭菌方法为0.5% HgCl2的处理15 min，在考虑选择何种灭菌剂的同时，还综合考虑了灭菌时间对灭菌效果的影响，与宋丽红及刘中兵的研究思路接近。
但也有研究认为，构树叶片外植体很佳消毒方法是0.1% 的HgCl2(加吐温80和0.5%次氯酸钠的二次灭菌法，这可能是由于试验材料的来源不同及其生长环境的差异，导致材料所带的微生物不同，从而需要灭菌的强度也有所差异。
在组织培养中，生长素类物质的主要作用是促进新梢生长，诱导外植体产生愈伤组织及促进培养组织的延伸生长;细胞分裂素类物质的主要作用是促进细胞的分裂和分化，诱导胚状体和不定芽的形成。
在离体条件下，器官的诱导并不是由某种生长激素的浓度所决定，而是为那些参与分化的物质间的比例关系所决定，当6-BA与NAA的比例低时有利于愈伤组织的形成和芽的生长;比例高时有利于芽的分化。
本试验研究结果表明，诱导愈伤组织分化时6-BA与NAA的适宜比例为3:2，壮苗时6-BA与NAA的适宜比例15:2;为生根时6-BA与NAA的适宜比例为1:2。
构树的育苗技术
1、播种育苗：
A、采种整地
选择10~15年生以上的健壮的无病植株作母树，10月份果实成熟时采果，将果肉搓烂漂洗得纯净种子，阴干、干藏备用，翌年春分前后播种。选择背风向阳，地势较平缓的坡地，或土壤肥沃且排水良好的地方整地做畦，畦宽1m，高20cm，畦间人行道40cm。
B、播种：
在畦上开播种沟，沟宽深为6×2cm，也可采用窄幅条播，播幅宽6cm，行间距25cm，种子与细土或细沙按照1:1的比例混匀后撒播，覆土0.5cm，稍加镇压即可。
2、飞籽育林
选择土壤肥沃深厚，不积水的向阳坡地或平地为造林地。栽植母树的株间距为8×8m，选用2年生的大苗栽植，每株穴内适当施肥。当母树林长至8~10年结实后，夏季整地除草。在秋季构树果实成熟前1周犁地，当种子全部落下以后，浅耙使入土种子与土壤结合。
A、幼苗抚育
幼苗要及时除草松土，培根，每年的4~5月份和7~8月份除草两次，松土施肥一次，促进林木快速生长。第一年可在林地间种黄豆，花生等短期矮杆作物和药材，苗木高1.5~2m时剪去顶芽，促进树干粗长和出新芽。
B、造林定植
秋末冬初进行，坑宽深40×40cm，株行距1.2×1.3m。造林的很佳时间是大寒前后，栽时保持根须舒展，把细土培入坑至2/3处踩实，盖草保湿，浇1次定根水。
