中草药熏蒸用于组培室空气消毒效果研究

  组培苗在培养过程中容易受微生物污染，污染直接影响生产成本及效率，打乱生产计划，因此，减少培养环境的微生物污染对降低组培室的污染率至关重要，空气消毒是切断微生物传播途径，将污染降低的有力措施。中草药在我国拥有着悠久的历史，是我国医学上的珍宝，中药功效各异，抗菌消炎是其中的重要功效之一，中草药烟熏消毒是古时流行的一种空气消毒方法。随着环保意识观念的增强，近年来人们在对消毒制剂的选择上越来越倾向于天然、无不良反应、消毒效果强的中草药，将中草药用于组培室的空气消毒少有报道，但在各大医院消毒中却时常有报道，可见中草药在空气消毒方面有其独特的效果。本研究利用4种中草药艾叶、大青叶、诃子及连翘对组培室进行熏蒸消毒，从品种、用量及熏蒸时间3个方面探索中草药对培养室空气消毒的效果，旨在克服常规消毒方法的不足，开辟绿色健康、安全可靠的组培室空气消毒新技术、新方法，为中草药在组培室空气消毒中的应用及发展提供理论依据和技术参考。

  1 材料与方法

  1.1 试验材料供试材料艾叶、大青叶、诃子、连翘购买于中药房。试剂与仪器：95%乙醇、MS培养基、琼脂、恒温培养箱、分析天平、超净工作台、培养皿、烧杯、灭菌锅、托盘、打火机、量筒、pH试纸、镊子。

  1.2 试验方法

  1.2.1试验材料的处理 艾叶可直接点燃;大青叶和诃子及连翘须与95%乙醇按1∶2的比例密闭浸泡24h备用。

  1.2.2 试验场所 本试验以百色学院化生楼组培室为消毒对象，组培室大小为92.48m3。在使用4种中草药对组培室进行试验时室内温度、相对湿度均相同。在进行中草药熏蒸试验前将组培室打扫干净，关闭组培室门窗，除操作人员外，其他人员禁止入内。

  1.2.3 采样方法 将9个直径为95mm含有MS培养基的平板放置在组培室的各个角落及中间位置，打开培养皿盖使平板暴露在空气中采用自然沉降法收集空气中菌落数，采样时间为30min，采样期间禁止人员走动。将消毒前后采样的平板置于30℃恒温培养箱中培养72h后观察培养皿中菌落数，并做好实验记录。采样前后用75%酒精擦拭双手，避免手上所带菌落污染平板，影响试验结果。

  1.2.4 不同中草药熏蒸对组培室消毒效果影响 本试验使用培养基为组织培养常用MS培养基。艾叶、大青叶、诃子、连翘4种中草药的用量均为2.0g/m3。试验期间不能使用其他消毒剂或物理方法对组培室进行消毒。试验前根据试验用量及处理方式准备好药品。将中草药置于托盘中在组培室中分5个点燃烧，使中药中的有效成分挥发至空气中，熏蒸1h后取样，以熏蒸前30min采样为对照，每组试验重复4次，用平均灭菌率比较灭菌情况，从中筛选出消毒效果佳的中草药。

  1.2.5 适中草药用量及适消毒时间的确定 将筛选出的佳消毒效果中药进行适中草药用量及适消毒时间试验，试验用量分别为1.0g/m3、2.0g/m3和3.0g/m3，消毒时间按烟熏后0.5h、1h、1.5h、2h的时间分别进行采样，以熏蒸前30min采样为对照，每组试验重复4次，用平均灭菌率比较灭菌情况。

  1.3 菌落的检测与统计菌落检测：在观察结果时，根据菌落外观按霉菌、细菌进行菌落的分类。

菌落统计：统计好试验前后各培养皿菌落数，根据奥氏公式分别计算熏蒸前和熏蒸后组培室空气中的含菌量。