多花黄精是百合科(LiliaceaeA.L.Jussieu)黄精属(PolygonatumMill)多年生草本植物，其根状茎为我国传统大宗药材，具有补气，养阴，健脾，润肺，延年益寿等功效。《中华人民共和国药典》2005年版一部收藏中药材黄精为百合科黄精属植物滇黄精PolygonatumkingianumColl.etHemsl、黄精P.sibiricumRed.或多花黄精P.cyrtonemaHua的干燥根茎。按形状不同，习称“大黄精”、“鸡头黄精”、“姜形黄精”。由于黄精的规范化栽培研究才刚刚起步，野生生长环境复杂多变...
上一个：培养架的参数与规格配置
下一个：植物细胞的分化及影响因素
1 材料与方法
1.1 无菌体系的建立
材料为多花黄精Polygonatum cyrtonema Hua，取福建农业科学院药用植物中心收集的野生多花黄精资源，剥取带芽根茎，剥离叶包片，流水冲洗2 h，分不同消毒时间和消毒剂量处理，经表面消毒后，切成0.5 cm长的茎尖组织接种到MS培养基中，25±1 ℃，遮光处理。
1.2 多花黄精茎尖诱导分化
将没有污染的多花黄精外植体转接到诱导分化培养基中，25±1 ℃，光照1 500 Lx，时间10 h。
1.3 BA对多花黄精增殖系数的影响
将诱导分化的多花黄精茎尖从诱导分化培养基转移到不同BA激素组合的继代与增殖的培养基中，确定佳的BA浓度，25±1 ℃，光照1 500 Lx，时间10 h。
2 结果与分析
2.1 不同消毒组合对无菌苗建立的影响
为了确定多花黄精茎尖无菌苗建立佳的消毒方式和消毒时间，因两种不同浓度的HgCl2和消毒时间设置了8种消毒组合，重复三次。接种30 d后，观察统计污染个数、萌芽个数、死亡个数(见表1)。从表中可以发现0.1%HgCl2浸泡5 min污染率高，高达85%，没有得到满意效果，随消毒时间增加污染率明显下降，达到30%，表明消毒时间过短不利于外植体的存活。在20 min消毒时间下，多花黄精污染率还是偏高，这表明一般情况下的0.1%HgCl2不能满足其消毒，故选择加大浓度用0.2%HgCl2来提高外植体的成活率。对比两种浓度，在0.2%HgCl2下污染率明显下降，在20 min时污染率低，此时存活率却不是高，因为高浓度长时间的消毒，对外植体的毒害作用强;在15 min时，污染率低存活率高，满足多花黄精的外植体消毒，达到两者之间的一个平衡。
表1 不同消毒组合对无菌苗建立的影响
注：污染率=污染的个数/接种的总个数×100%，存活率=存活个数/接种的总个数×100%
2.2 不同的生长调节剂组合对多花黄精分化的影响
为确定更适合多花黄精分化的生长调节剂，比较了BA，IBA，KT在浓度10 mg·L-1时的分化率，其中保持NAA浓度在0.2 mg·L-1，设计了表2的试验方案，每组合接种20个，30 d后观察统计，重复三次试验。
表2 不同的生长调节剂组合对多花黄精分化的影响
分化率=分化个数/接种个数*100%
从表2中可以看出，在这几种培养基中，添加了BA的分化率明显比未加BA分化率高，其分化率分别达到：85%，80%，75%，其他两种生长调节剂所产生的分化率要低于BA所达到的分化率。多花黄精所分化的生长调节剂要明显高于其他的材料，需要高浓度，这与其他研究者发现不同。需要高浓度的外源激素来刺激多花黄精的分化，通过高渗透来提高其分化，这将为下一步的研究作出明确方向。见图1。
图1 多花黄精的诱导分化
2.3 BA对多花黄精丛生芽增殖系数的影响
通过对多花黄精分化的生长调节剂选择可以看出BA对多花黄精分化具有明显的作用，在其增殖过程中着重考虑BA的影响，而初步试验中得到BA低浓度时多花黄精不能分化，因此采取高浓度的BA，故做了表3中的设计方案。每瓶接种1个芽，接种10瓶，一个月后统计丛生芽的个数，观察统计增殖系数，重复三次。
表3 BA对多花黄精增殖系数的影响
增殖系数=继代时丛生芽个数/接种时丛生芽个数
从表3中可以看出，BA浓度在10 mg·L-1～60 mg·L-1范围内，高浓度的BA均能有较好诱导增殖，BA浓度为40 mg·L-1达到佳，增殖系数达到2.8，在BA浓度为60 mg·L-1时增殖系数低，为1.6，相对也有不错的增殖率。在一定高浓度范围内，随着BA浓度的提高，茎尖增殖系数随着增加，BA浓度增至40 mg·L-1时，增殖系数大。从表现性状上看，高浓度的BA对多花黄精芽分化起着很重要的作用。为何需要如此高浓度，其中机理需要进一步的研究。见图2。
图2 BA对多花黄精增殖的影响
3 讨论
在多花黄精离体培养初步研究过程中发现，福建多花黄精的无菌体系建立存在困难，在10 d后还会出现内生菌，这给外植体消毒带来难度，高浓度长时间消毒不利于外植体的存活，过低时又不能得到高存活率。究其原因，可能是因为材料取源于野生种源，在材料本身中存在着内生菌。另外，消毒过程中的切割也得，避免其所产生的黏液。
在多花黄精增殖过程中，高浓度的BA会提高多花黄精的增殖系数，这个与已见报道的不一样，通过茎尖切片在低浓度的BA和2，4-D作用下诱导产生愈伤组织，愈伤组织分化后产生新植株。本文采取的是高浓度直接在块根上刺激潜伏芽重新分化成新的植株，经初步试验中低浓度对潜伏芽重新萌芽作用不大，高浓度的BA有利于潜伏芽的分化，可以在栽培过程中进行前处理，有可能扩大多花黄精栽培萌芽率。目前在探索如何降低高浓度的BA，以期能够在快速繁殖过程中得到扩繁，有益于工厂化生产。
